Для качественного определения белка в моче используют. Белок мочи (протеинурия). Определение белка в моче. на анализ белка

В состав рабочего места по определению белка в моче входят следующие элементы:

1. Пробирки химические, агглютинационные.
2. Набор градуированных пипеток.
3. Пипетки с узким оттянутым концом.
4. Спиртовки или газовая горелка.
5. Черная бумага.
6. Ледяная уксусная кислота.
7. Сульфосалициловая кислота.
8. Концентрированная азотная кислота.
9. Дистиллированная вода.

Методики определения белка в моче

Все методики, применяющиеся для качественного определения белка в моче, основаны на свертывании белка. Свертывание белка проявляется выраженным в разной степени помутнением (от опалесценции до большой мутности) или выпадением хлопьев.

Качественное определение белка в моче может быть проведено одним из следующих способов:

1. кипячением с 10% раствором уксусной кислоты;
2. реакцией с 20% раствором сульфосалициловой кислоты;
3. реакцией с 50% раствором азотной кислоты (проба Геллера);
4. реакцией с 1% раствором азотной кислоты в насыщенном растворе поваренной соли (видоизмененная проба Геллера по Ларионовой).

Перед качественным определением белка в моче проводят следующую подготовительную работу:
1. Мутную мочу фильтруют через бумажный фильтр. Если получить прозрачный фильтрат не удается, производят повторное фильтрование через тот же фильтр или же смешивают мочу с небольшим количеством инфузорной земли или талька, после чего ее фильтруют.
2. Если моча имеет щелочную реакцию, ее подкисляют 10% раствором уксусной кислоты до слабокислой реакции под контролем лакмусовой или универсальной индикаторной бумажки.
3. При малом содержании солей (светло-желтая или бледно-желтая моча с малым удельным весом) к каждой
пробе добавляют несколько капель насыщенного раствора поваренной соли, так как недостаток солей обусловливает свертывание белка.
4. Степень помутнения наблюдают с помощью черного фона. В качестве фона используют черный картон или черную бумагу, применяемую в фотографии. Учет реакции на черном фоне позволяет выявить малейшую степень помутнения.

В отдельном штативе располагают пронумерованные пробирки. В них производят одну из описанных ниже реакций.

1. Проба кипячением с 10% раствором уксусной кислоты. Для постановки этой пробы необходим 10% раствор уксусной кислоты, который готовят следующим образом: 10 мл ледяной уксусной кислоты помещают в цилиндр и доливают дистиллированной водой до метки 100 мл.

Техника определения белка. В химическую пробирку помещают 10—12 мл отфильтрованной мочи слабокислой реакции. Затем верхнюю часть пробирки с мочой осторожно нагревают до кипения и добавляют в нее 8—10 капель 10% раствора уксусной кислоты. Пробирку с мочой рассматривают на черном фоне в проходящем свете. При наличии белка в моче появляется мутность разной степени (от опалесценции до большой мутности) или выпадают хлопья. Контролем служит нижняя часть пробирки, не подвергавшаяся нагреванию. Этой пробой обнаруживают количество белка, начиная с 0,015%о (%о — promille).

2. Реакция с 20% раствором сульфосалициловой кислоты. 20 % раствор сульфосалициловой кислоты готовят следующим образом: 20 г сульфосалициловой кислоты растворяют в 70-80 мл дистиллированной воды, переводят в цилиндр емкостью 100 мл и доливают дистиллированной водой до метки. Приготовленный реактив хранят в посуде из темного стекла.

Техника определения белка. В две пробирки одинакового диаметра помещают по 2—3 мл отфильтрованной мочи слабокислой реакции, в одну из пробирок к моче прибавляют 3—4 капли 20% раствора сульфосалициловой кислоты, другая пробирка служит контролем. При наличии белка в пробирке с реактивом появляется мутность или выпадают хлопья свернувшегося белка. В контрольной пробирке жидкость остается прозрачной. Сульфосалициловая кислота наряду с белком сыворотки осаждает альбумозы (пептиды), представляющие собой продукт распада белка. С целью уточнения причины помутнения мочи пробирку с мочой подогревают. Мутность, причиной образования которой оказались сывороточные белки, усиливается, мутность же, обусловленная присутствием альбумоз, исчезает. Эта проба имеет ту же чувствительность, что и предыдущая.

3. Реакция с 50 % раствором азотной кислоты (проба Геллера). 50% раствор азотной кислоты готовят следующим образом: к 50 мл азотной кислоты удельного веса 1,2-1,4 приливают 50 мл дистиллированной воды (разведение 1:1).

Техника определения белка. В узкую небольшую пробирку (тина агглютинационной) наливают 1 мл 50% азотной кислоты. В пипетку с узким оттянутым концом набирают 1 мл отфильтрованной исследуемой мочи, наслаивают на реактив и пробирку переводят в вертикальное положение. При наличии белка на границе жидкостей появляется белое кольцо. Время появления кольца, его свойства зависят от количества белка: если белка мало, то кольцо появляется не сразу, поэтому за его появлением следят в течение 2,5-3 минут. Минимальное количество белка, определяемое этим методом, 0,033°/оо. При меньшем содержании белка в моче кольцо не образуется. Учет результатов реакции производят на черном фоне в проходящем свете.

4. Реакция с 1% раствором азотной кислоты на насыщенном растворе поваренной соли - видоизмененная проба Геллера (по Ларионовой). Для проведения пробы используют 1 % раствор азотной кислоты, приготовленный на насыщенном растворе поваренной соли (реактив Ларионовой). 35 г поваренной соли растворяют в 100 мл дистиллированной поды, раствор фильтруют, к 1 мл концентрированной азотной кислоты удельного веса 1,2-1,4 приливают 99 мл приготовленного насыщенного раствора поваренной соли.

Техника определения белка такая же, как и при реакции с 50% раствором азотной кислоты (проба Геллера), но вместо 1 мл 50% раствора азотной кислоты в пробирку наливают 1 мл реактива Ларионовой и на него наслаивают 1 мл мочи. Появление белого кольца на границе жидкостей указывает на наличие белка в исследуемой моче. Проба по Ларионовой так же чувствительна, как и проба Геллера.

5. Колориметрическая (сухая) проба качественного определения белка. Колориметрическая (сухая) проба качественного определения белка в моче основана на воздействии, которое оказывает белок на цвет индикатора в буферном растворе.

Техника определения белка. Кусочек индикаторной бумаги, предназначенный для определения белка погружают в мочу на короткое время. Пробу считают положительной, если бумажка окрашивается в сине-зеленый цвет.

Количественное определение белка в моче

Количественное определение белка в моче основано на том, что при наслаивании мочи, содержащей белок, на 50% раствор азотной кислоты или реактив Ларионовой на границе двух жидкостей образуется белое кольцо, причем если четкое белое кольцо появляется к 3 минутам, то содержание белка равно 0,033%о или 33 мг в 1000 мл мочи. Появление кольца ранее 3 минут свидетельствует о большем содержании белка в моче.
При количественном определении белка в моче выполняют следующие правила:

1. Количественное определение белка производят только в тех порциях мочи, где он был обнаружен качественно.
2. Определение производят с тщательно отфильтрованной мочой.
3. Точно соблюдают технику наслаивания исследуемой мочи на 50% раствор азотной кислоты или реактив Ларионовой в соотношении реактива с мочой (1:1).
4. Время появления кольца определяют по секундомеру: при окончательном расчете количества белка учитывают время наслаивания мочи на азотную кислоту, которое равно 15 секундам.
5. Разведение мочи производят исходя из свойства кольца. При этом каждое последующее разведение мочи готовят из предыдущего.
6. Определение колец производят на черном фоне.

Наиболее распространены два метода количественно¬го определения белка в моче: метод Робертса - Стольникова - Брандберга и метод С. Л. Эрлиха и А. Я. Альтгаузена.

1. Метод Робертса-Стольникова-Брандберга. По этому способу количество белка в моче определяют путем разведения ее до тех пор, пока при очередном наслаивании мочи на 50% раствор азотной кислоты или реактив Ларионовой кольцо появится точно к 3 минутам. Расчет количества белка производят, умножая 0,033%о на степень разведения мочи. Полученный результат выражает количество белка в миллиграммах на 1000 мл мочи, т. е. в promille (%о).
2. Метод С. Л. Эрлиха и А. Я. Альтгаузена. В штатив помещают ряд агглютинационных пробирок, в которые предварительно наливают по 1 мл 50% раствора азотной кислоты или реактива Ларионовой. Исследуемую мочу берут отдельной чистой, сухой пипеткой с узким оттянутым концом и наслаивают на реактив, после чего включают секундомер. За временем появления кольца следят, располагая пробирку на черном фоне. При появлении кольца секундомер выключают.

При наслаивании мочи в зависимости от количества белка может появиться компактное, широкое или нитевидное кольцо. Компактное, широкое кольцо появляется тотчас же после наслаивания мочи на реактив. Нитевидное кольцо может появиться сразу, до истечения одной минуты, или в промежутке от одной до 4 минут.

При появлении нитевидного кольца в пределах от одной до 4 минут производить разведение мочи не нужно!
Для вычисления количества белка в этом случае достачно использовать предложенную авторами таблицу-план (табл. 1).

Пример 1. При наслаивании мочи на реактив нитевидное кольцо образовалось через 2 минуты. Если бы кольцо образовалось к 3 минутам, то количество белка было было бы равно 0,033%о.

В данном же случае кольцо образовалось раньше. Соответственная поправка, согласно таблице-плану, для времени в 2 минуты равна 1+1/8. Это значит, что белка в данной порции мочи будет в 1+1/8 раза больше, чем 0,033°/оо, т. е. 0,033%о X(1+1/8) = 0,037°/оо.

При появлении нитевидного кольца до 1 минуты, т. е. через 40-60 секунд, производят одно разведение мочи в 1,5 раза (2 части мочи + 1 часть воды), а затем вновь наслаивают разведенную мочу на реактив и регистрируют появление кольца. При расчете результатов учитывают, что моча была разведена в 1,5 раза.

Пример 2. После наслаивания разведенной в 1,5 раза мочи нитевидное кольцо появилось к 2 минутам. Если бы кольцо появилось к 3 минутам, то белка было бы 0,033%. Соответственная поправка согласно таблице-плану, для времени в 2 минуты равна 1+1/8. Белка в моче содержится 0,033%оX1,5X(1+1/8) = 0,056%о.

Если нитевидное кольцо появляется сразу, мочу разводят в 2 раза (1 часть мочи + 1 часть воды). Разведенную мочу вновь наслаивают на реактив и отмечают появление кольца по истечении 1 минуты.

Пример 3. При наслаивании разведенной в 2 раза мочи на реактив нитевидное кольцо появилось через 1 минуту 15 секунд. Тогда количество белка в исследуемой моче по аналогии с прежними расчетами будет равно
0,033%оХ2Х(1+3/8) = 0,091%.
В случае появления широкого кольца мочу разводят в 4 раза (1 часть мочи + 3 части воды).
При последующем наслаивании разведенной мочи нитевидное кольцо может образоваться как до, так и по истечении одной минуты. В таких случаях расчет количества белка производят по аналогии с предыдущими примерами, т. е. 0,033% о умножают на степень разведения и на соответственную поправку.

Пример 1. Кольцо после разведения мочи в 4 раза появилось сразу же. Мочу разводят в 2 раза. После наслаивания мочи, разведенной в 8 раз (4X2), нитевидное кольцо образовалось через 1,5 минуты. В таком случае количество белка равно 0,033%оХ8X1,25 = 0,33%о и т. д.
При появлении компактного кольца мочу разводят в 8 раз (1 часть мочи+ 7 частей воды). При последующем наслаивании разведенной мочи на реактив может образоваться либо компактное, либо широкое, либо нитевидное кольцо.

Пример 2. При наслаивании мочи на азотную кислоту тотчас же образовалось компактное кольцо. Мочу разводят в 8 раз (1 часть мочи + 7 частей воды) и вновь производят ее наслаивание. При этом опять получилось компактное кольцо. Тогда мочу разводят еще в 8 раз (для этого в цилиндр или в пробирку берут 1 часть разведенной мочи и прибавляют к ней 7 частей воды). После очередного наслаивания разведенной мочи нитевидное кольцо образовалось сразу. Мочу разводят в 2 раза (1 часть мочи + 1 часть воды). После очередного наслаивания разведенной мочи нитевидное кольцо образовалось к 2 минутам. Расчет количества белка данной порции мочи производят так: 0,033,%оX8X8X2X(1+1/8) = 4,8%о.

Помимо таблицы-плана, имеется таблица с рассчитанными цифрами белка (табл. 2). Если моча не разведена, то количество белка отыскивают в графе «Цельная неразведенная моча». При разведении мочи в целое число раз (8,4,2) используют табл. 1. При разведении мочи в 1,5 раза используют табл. 2.

Техника пользования таблицей для определения содержания белка в моче

В соответствующих графах таблицы наводят время появления кольца и степень разведения мочи.
Цифра, находящаяся в точке пересечения горизонтальной и вертикальной линий, проведенных от этих двух показателей, указывает на количество белка в исследуемой моче (%о).

Возможно, что при положительной качественной пробе на белок кольцо при наслаивании на 50% раствор азотной кислоты не образуется. Это значит, что в моче белка меньше 0,033%о. В таких случаях количество белка в бланке анализа обозначают термином «следы».

Если белок определен количественно, в бланке анализа мочи отмечают содержание белка в promille, например «белок — 0,66%о».

Помимо количественного определения белка в отдельной порции мочи, рассчитывают суточное его количество в граммах. С этой целью собирают суточную мочу, измеряют ее количество и определяют содержание белка в promille. Затем производят расчет. Например, суточное количество мочи равно 1800 мл, белок - 7°/оо. Значит, белка в суточном количестве мочи содержится: 1,8X7 = 12,6 г.

Моча - это важная биологическая жидкость в организме человека. Большая часть продуктов обмена удаляется именно с ней. У здорового человека ее состав имеет относительно фиксированные значения. При возникновении заболевания некоторые показатели изменяются, что дает возможность лечащим врачам уточнить поставленный диагноз. Выявить проблемы в работе почек поможет анализ суточной мочи на белок.

Анализ суточной мочи или суточный диурез

Это лабораторное исследование, с помощью которого определяют количество выделившейся жидкости за сутки. Такой метод применяется для оценки состояния функционирования почек. Состав урины:

Каждого компонента в норме должно содержаться определенное количество, отклонение от которого считается патологией. При исследовании суточного на белок норма для взрослых мужчин и женщин одинаковая. При нормальной работе почек это вещество не должно попадать в урину или его может содержаться незначительное количество 40-80 мг. Выделение 150 мг и более считается патологией. Однако с возрастом, особенно после 60 лет, допускается небольшое превышение допустимого показателя, и связано это с возрастными изменениями в организме. В некоторых случаях выявление белка объясняется неправильной подготовкой перед сбором биоматериала или погрешностями в питании. У детей норма зависит от возраста, веса и площади поверхности тела.

Общая информация

По результатам лабораторных исследований суточной урины получают следующие сведения:

• Объем жидкости, который выделяется в течение суток из организма. В среднем, он составляет 1750 мл и может колебаться как в меньшую, так и в большую сторону в зависимости от объема выпитой жидкости.
• Сахар. Особенно важен этот показатель для пациентов, страдающих сахарным диабетом.
• Оксалаты. Превышение сверх допустимых границ чревато образованием в почках песка и камней.
• Метанефрин. Это вещество образуется после распада гормонов. Отклонения от нормы в сторону увеличения - это признак патологии почек, сердечно-сосудистой системы и др.
• Белок. У здоровых людей этого показателя не должна наблюдаться в урине. Это один из важных параметров, который выявляется при суточном анализе мочи. Завышенный уровень свидетельствует о признаках патологии почек, болезнях центральной нервной системы. Помимо общего количества белка, лабораторное исследование биологической жидкости позволяет обнаружить и белковые соединения, которые также важны для правильной постановки диагноза.

Показания к назначению анализа суточной мочи на белок

Ввиду того что изменения в качественном и количественном составе урины начинаются раньше, чем симптомы болезни, анализ позволяет своевременно выявить патологию. Показаниями к назначению этого вида исследований у взрослых и детей является наличие следующих заболеваний:

• амилоидоза (нарушение обмена белков);
• сахарного диабета;
• нефропатии, которая проявляется отеками ног;
• ишемии сердца;
• почечной недостаточности.

Кроме того, его назначают при приеме пациентом некоторых лекарственных средств: аминогликозидов, ингибиторов АПФ, диуретиков тиазидного ряда и некоторых других препаратов.

Подготовительный этап

Для большей информативности и получения наиболее объективной информации по итогам анализа суточной мочи на белок следует соблюдать определенные правила, которые обязательны для выполнения и заключаются в следующем:

• За сутки или более исключить употребление витаминных комплексов, антикоагулянтов и диуретических средств.
• За сутки изменить рацион. Отказаться от острой, жирной и сладкой пищи, а также алкогольных и кофейных напитков.
• Не сдавать биоматериал во время месячных.
• Для сбора урины приобрести в аптечном учреждении специальную тару или можно воспользоваться стеклянной банкой, объемом не менее трех литров.

на анализ белка?

Правила сбора биоматериала общие как для взрослых мужчин, так и для женщин и детишек, которые достигли определенного возраста и могут самостоятельно пользоваться горшком.

1. Непосредственно перед сбором урины необходимо выполнить туалет наружных половых органов.
2. Первая порция биоматериала не учитывается. Однако фиксируется время утреннего мочеиспускания.
3. Собирают всю выделяемую жидкость в течение 24 часов. В ночное время также продолжается сбор урины.
4. Тару с биоматериалом рекомендуется хранить при температуре не выше 8 градусов и не ниже 5.
5. Сразу после забора последней порции, собранную мочу следует тщательно перемешать.
6. Предварительно у доктора следует уточнить, как сдавать суточный анализ мочи на белок в лабораторию. Существует два способа. Около 100 мл биоматериала отливают в емкость маленького размера и относят в лабораторию или можно доставить весь суточный объем в большой таре.
7. В случае, когда имеет значение изменение диуреза за сутки, то доктор рекомендует фиксировать объем любой потребляемой жидкости в течение 24 часов.

Как собирать суточный анализ мочи на белок детям до года? Такой вопрос интересует молодых мамочек. При назначении подобного исследования малышам, педиатры советуют приобрести специальное устройство для сбора биоматериала, которое свободно продается в аптеках. Не следует выжимать жидкость из подгузников или ловить момент, когда малыш захочет помочиться.

Протеинурия или белок в суточной моче

Таким термином обозначают высокие показатели белковых веществ в урине. С ее помощью отслеживают работу почек. Различают протеинурию следующих видов. Легкая - не является предвестником заболеваний и возникает по естественным причинам. Умеренная и выраженная - эти виды свидетельствуют о проблемах в работе почек. В этих случаях, кроме белка в суточном анализе мочи, присутствуют такие симптомы, как:

• боли в костях;
• головокружение;
• потеря аппетита;
• сонливость;
• тошнота;
• рвота;
• сильная утомляемость.

Причины появления белка в урине:

• сердечная недостаточность;
• болезни центральной нервной системы;
• гипертиреоз;
• инфекционный эндокардит.

На изменение состава урины указывает ее оттенок, появление белесоватого окрашивания — это признак присутствия альбумина, вещества белковой природы.

Типы протеинурии

Основным фактором, оказывающим влияние на появление в урине белковых соединений, являются неполадки в усвоении этого вещества. Различают протеинурию:

• Канальцевую. При некоторых заболеваниях невозможно или затруднительно всасывание белков.
• Клубочковую. В этом случае белковые молекулы не задерживаются и вместе с жидкостью выводятся. Такое явление характерно при следующих патологиях: пиелонефрит, повреждение почек токсинами, гломерулонефрит.
• Экстраренальная. Присутствуют повреждения мочевыводящих путей, характерные для уретритов, кольпитов и циститов.

Для определения типа протеинурии применяется ее микроскопическое исследование. Далее, при необходимости доктор назначает и другие виды обследований, включающие ультразвук, магнитно-резонансную томографию и другие аппаратные методы.

Белок в моче при беременности. Причины

Белок - это строительный материал, принимающий участие в различных процессах в организме индивида. Выявление его в урине считается признаком развития патологических процессов. Почечные тельца теряют целостность и вместе с вредными веществами в мочу попадает белок, а причиной такого сбоя является воспалительный процесс в почках. Анализ урины позволяет своевременно распознать болезнь, удостовериться в правильной работе почек в самый ответственный и важный период в жизни женщины. Любое, даже самое незначительное выявление белка у беременных в суточном анализе мочи - это признак начала развития патологии. Причинами его появления являются следующие заболевания:

• гломерулонефрит;
• красная волчанка;
• нефрит;
• гипертония;
• диабет сахарный.

А также инфекционные и воспалительные процессы в почках, их травмы механической природы, ожоги, переохлаждения, отравления токсическими веществами или лечение злокачественных новообразований химиотерапевтическими препаратами до наступления беременности.

Безопасная беременность

С целью диагностики заболеваний почек используют простой метод - это суточной анализ мочи на белок. Соблюдение условий для правильного сбора мочи является обязательным для любой женщины в положении.

1. Наружные половые органы должны быть чистыми. Подмываться можно с использованием обычного мыла. Использовать антисептики или травяные сборы запрещено, так как они исказят достоверность результатов.
2. Собирают урину в чистую сухую тару с широким горлом.

В случае обнаружения в моче белка доктор назначает лечение, которое защитит плод от отрицательного влияния заболевания, ставшего причиной появления веществ белковой природы в урине. Далее следует выяснить причину этого явления. В большинстве случаев она кроется в нарушении работы почек. Появление белка в биоматериале во второй половине беременности - это один из симптомов гестоза. Затем присоединяются отеки, перепады артериального давления.

• суточный анализ мочи на белок;
• регулярное посещение доктора;
• контроль за давлением;
• питание, усиленное витаминными комплексами;
• умеренное потребление жидкости;
• отказ от специй и по возможности от соли или уменьшение ее количества до минимума.

С профилактической целью, а также для уменьшения белковых соединений в моче доктор может назначить лекарственные средства на растительной основе или отвары трав, обладающих мочегонным действием.

Лечение и профилактика

Расшифровку анализов следует доверить своему доктору. В случае выявления патологических причин появления белковых веществ в урине необходимую терапию назначает только медицинский работник. Не рекомендуется самостоятельно лечиться и увлекаться нетрадиционными методами. При выявлении причин, не связанных с патологическими процессами, уделяют особое внимание рациону. Важно помнить, что эффективность терапии зависит от своевременной диагностики.

Небольшое количество белка в суточной моче обнаруживается и у вполне здоровых лиц, однако такие небольшие концентрации не выявляют в разовых порциях используемыми в настоящее время методами. Приблизительно 70% белков мочи здорового человека приходится на долю уромукоида - белка, являющегося продуктом почечной ткани; таким образом, доля гломерулярного белка в моче здоровых людей является ничтожно малой и протеинурия в норме составляет 50-150 мг/сут, причем большинство белков мочи идентично сывороточным.

Принято различать следующие формы протеинурии в зависимости от места возникновения: преренальную, связанную с усиленным распадом белка тканей, выраженным гемолизом; ренальную, обусловленную патологией почек, которая может быть разделена на клубочковую и канальцевую; постренальную, связанную с патологией мочевыводящих путей и чаще всего обусловленную воспалительной экссудацией.

В зависимости от длительности существования выделяют постоянную протеинурию, существующую в течение многих недель и даже лет, и преходящую, появляющуюся периодически, иногда даже при отсутствии патологии почек, например при лихорадке и выраженной интоксикации. Целесообразно различать вариабельность протеинурии: при суточной потере белка до 1 г - умеренную, от 1 до 3 г - среднюю и более 3 г - выраженную.

Обнаружение в моче белков с относительно большой молекулярной массой свидетельствует об отсутствии избирательности почечного фильтра и выраженном его поражении. В этих случаях говорят о низкой селективности протеинурии. Поэтому в настоящее время широкое распространение получило определение белковых фракций мочи. Наиболее точны методы электрофореза в крахмальном и полиакриламидном геле.
По результатам, полученным этими методами, можно судить о селективности протеинурии.

Большинство качественных и количественных методов определения белка в моче основаны на его коагуляции в объеме мочи или на границе сред (мочи и кислоты); если есть способ измерить интенсивность коагуляции, то проба становится количественной.

Унифицированная проба с сульфосалициловой кислотой:

Необходимый реактив:

20%-ный раствор сульфосалициловой кислоты.

Ход исследования:

В 2 пробирки наливают по 3 мл профильтрованной мочи. В опытную пробирку прибавляют 6-8 капель реактива. На темном фоне сравнивают контрольную пробирку с опытной. Помутнение в опытной пробирке указывает на наличие белка, пробу считают положительной.

Если реакция мочи щелочная, то перед исследованием ее подкисляют 2-3 каплями 10%-ного раствора уксусной кислоты.

Унифицированный метод Брандберга-Робертса-Стольникова:

В основу метода положена кольцевая проба Геллера, заключающаяся в том, что на границе азотной кислоты и мочи при наличии белка происходит его коагуляция и появляется белое кольцо.

Необходимый реактив:

30%-ный раствор азотной кислоты (относительная плотность 1,2) или реактив Ларионовой.
Приготовление реактива Ларионовой: 20-30 г хлорида натрия растворяют при нагревании в 100 мл дистиллированной воды, дают остыть, фильтруют. К 99 мл фильтрата приливают 1 мл концентрированной азотной кислоты.

Ход исследования:

В пробирку наливают 1-2 мл азотной кислоты (или реактива Ларионовой) и осторожно, по стенке пробирки, наслаивают такое же количество профильтрованной мочи. Появление тонкого белого кольца на границе двух жидкостей между 2 и 3-й минутой указывает на наличие белка в концентрации примерно 0,033 г/л. Если кольцо появляется раньше 2 мин после наслаивания, мочу следует развести водой и провести повторное наслаивание уже разведенной мочи. Степень разведения мочи подбирают в зависимости от вида кольца, т.е. его ширины, компактности и времени появления. При нитевидном кольце, появившемся ранее 2 мин, мочу разводят в 2 раза, при широком - в 4 раза, при компактном - в 8 раз и т.д. Концентрацию белка при этом вычисляют путем умножения 0,033 на степень разведения и выражают в граммах на 1 л (г/л).

Иногда белое кольцо получается при наличии больших количеств уратов. В отличие от белкового кольца уратное появляется немного выше границы между двумя жидкостями и растворяется при легком нагревании.

Количественное определение белка в моче по помутнению, образующемуся при добавлении сульфосалициловой кислоты:

Принцип метода:

Интенсивность помутнения при коагуляции белка сульфосалициловой кислотой пропорциональна его концентрации.

Необходимые реактивы:

1. 3%-ный раствор сульфосалициловой кислоты.

2. 0,9%-ный раствор хлорида натрия.

3. Стандартный раствор альбумина - 1%-ный раствор (1 мл раствора, содержащий 10 мг альбумина): 1 г лиофилизированного альбумина (из человеческой или бычьей сыворотки) растворяют в небольшом количестве 0,9%-ного раствора хлорида натрия в колбе вместимостью 100 мл, а затем доводят до метки тем же раствором. Реактив стабилизируют прибавлением 1 мл 5%-ного раствора азида натрия (NaN3). При хранении в холодильнике реактив годен в течение 2 месяцев.

Специальное оборудование - фотоэлектроколориметр.

Ход исследования:

В пробирку вносят 1,25 мл профильтрованной мочи, доливают до 5 мл 3%-ным раствором сульфосалициловой кислоты, перемешивают. Через 5 мин измеряют на фотоэлектроколориметре при длине волны 590-650 нм (оранжевый или красный светофильтр) против контроля в кювете длиной оптического пути 5 мм. Контролем служит пробирка, в которой к 1,25 мл профильтрованной мочи долили до 5 мл 0,9%-ный раствор хлорида натрия. Расчет ведут по калибровочному графику, для построения которого из стандартного раствора готовят разведения, как указано в таблице.

Из каждого полученного раствора берут 1,25 мл и обрабатывают, как опытные пробы.

Прямолинейная зависимость при построении калибровочного графика сохраняется до 1 г/л. При более высоких концентрациях пробу следует разводить и учитывать разведение при расчете.

Ложноположительные результаты могут быть получены при наличии в моче контрастных веществ, содержащих органический йод. Поэтому тест нельзя использовать у лиц, принимающих препараты йода; ложноположительный результат может быть также обусловлен приемом сульфаниламидных препаратов, больших доз пенициллина и при высоких концентрациях в моче мочевой кислоты.

Биуретовый метод:

Принцип метода:

Пептидные связи белка с солями меди в щелочной с образуют комплекс фиолетового цвета. Белки предварительно осаждают трихлоруксусной кислотой.

Необходимые реактивы:

1. 10%-ный раствор трихлоруксусной кислоты.
2. 20%-ный раствор меди (CuSO4∙5H2O).
3. 3%-ный раствор NaOH.

Ход исследования:

К 5 мл мочи, взятой из суточного количества, прибавляют 3 мл раствора трихлоруксусной кислоты, центрифугируют до постоянного объема осадка. Надосадочную жидкость отсасывают пипеткой, осадок затем растворяют в 5 мл раствора NaОН. К раствору добавляют 0,25 мл CuSO4, смесь перемешивают и центрифугируют. Надосадочную жидкость фотометрируют при длине волны 540 нм в кювете с длиной оптического пути 10 мм против дистиллированной воды. Концентрацию белка рассчитывают по калибровочной кривой, при построении которой на оси ординат откладывают концентрацию белка (г/л), а на оси абсцисс - оптическую плотность в единицах экстинкции. По полученной концентрации рассчитывают суточную потерю белка с мочой.

С помощью индикаторной бумаги (полосок):

Белок может быть обнаружен с помощью индикаторной бумаги (полосок), которые выпускаются фирмами “Albuphan”, “Ames” (Англия), “Albustix”, “Boehringer” (Германия), “Comburtest” и др.

Принцип основан на феномене так называемой протеиновой ошибки некоторых кислотно-щелочных индикаторов. Индикаторная часть бумаги пропитана тетрабромфеноловым синим и цитратным буфером. При увлажнении бумаги буфер растворяется и обеспечивает соответствующий рН для реакции индикатора.

При 3,0-3,5 аминогруппы белков реагируют с индикатором и меняют его первоначально желтую окраску на зеленовато-синюю, после чего, сравнивая с цветной шкалой, можно ориентировочно оценить концентрацию белка в исследуемой моче. Основной предпосылкой правильной работы индикаторных полосок является обеспечение pH в диапазоне 3,0-3,5 для протекания реакции.

Если бумага находится в контакте с исследуемой мочой дольше экспозиции, указанной в инструкции, то цитратный буфер в ней растворяется, и тогда индикатор реагирует на истинный рН мочи, т.е. дает ложноположительную реакцию. В связи с тем, что емкость буфера ограничена, то даже при соблюдении методических указаний в пробах слишком щелочной мочи (pH > 6,5) получаются ложноположительные результаты, а в пробах слишком кислой мочи (рН
Число реагирующих аминогрупп в составе отдельных белков различно, поэтому альбумины реагируют в 2 раза интенсивнее, чем такое же количество γ-глобулинов (белок Бенс-Джонса, парапротеины), и гораздо интенсивнее, чем гликопротеиды. Однако при большом количестве слизи с высоким содержанием гликопротеидов (при воспалении мочевыводящих путей) оседающие на индикаторной полоске хлопья слизи могут давать ложноположительные результаты.

Чувствительность отдельных производственных серий индикаторной бумаги, равно как и отдельных видов бумаги, выпускаемых одной и той же фирмой, может быть различной, поэтому к количественной оценке белка этим методом следует относиться осторожно. Определение суточной потери белков с мочой при помощи индикаторной бумаги невозможно. Таким образом, индикаторная бумага уступает химическим пробам, в первую очередь пробе с сульфосалициловой кислотой, хотя и дает возможность быстрого исследования серии образцов.

Обнаружение в моче белка Бенс-Джонса:

Белок Бенс-Джонса может выделяться с мочой при миеломной болезни, макроглобулинемии Вальденстрема.

Исследование целесообразно проводить только при положительной пробе с сульфосалициловой кислотой. Индикаторная бумага для обнаружения белка Бенс-Джонса непригодна.

Принцип:

Основан на реакции термопреципитации. Методы, с помощью которых оценивают растворение белка Бенс-Джонса при температуре 100 °С или повторное осаждение при последующем охлаждении, ненадежны, так как далеко не все белковые тела Бенс-Джонса обладают соответствующими свойствами. Наиболее достоверно выявление этого парапротеина осаждением его при температуре 40-60 °С, но и в этих условиях осаждение может не произойти в слишком кислой (рН 6,5) моче, при низкой относительной плотности мочи и при низкой концентрации белка Бенс-Джонса.

Необходимый реактивы:

2 М ацетатный буфер рН 4,9.

Ход исследования:

Профильтрованную мочу в количестве 4 мл смешивают с 1 мл буфера и согревают в течение 15 мин на водяной бане при температуре 56 °С. При наличии белков Бенс-Джонса уже в течение 2 мин появляется выраженный осадок, при концентрации белка Бенс-Джонса менее 3 г/л проба может получиться отрицательной. На практике это встречается крайне редко, так как большей частью концентрация белка Бенс-Джонса в моче значительная.

С полной достоверностью белок Бенс-Джонса может быть обнаружен иммуноэлектрофоретическим исследованием при использовании специфических сывороток против тяжелых и легких цепей иммуноглобулинов.

Определение альбумоз (протеоз):

Альбумозы - это продукты расщепления белков, принцип определения которых основан на том, что они не сворачиваются при кипячении, но дают положительную биуретовую реакцию и высаливаются некоторыми солями, особенно сульфатом аммония и ацетатом цинка в кислой среде.

Нормальная моча альбумоз не содержит. Следы могут быть в нормальной моче в случае примеси семенной жидкости. В патологии альбумозы могут встречаться в моче при лихорадочных состояниях, переливании крови и плазмы, рассасывании экссудатов и транссудатов, распаде опухолей.

Необходимые реактивы:

1. Насыщенный раствор хлорида натрия.
2. Концентрированный раствор едкого натра.
3. Слабый раствор сульфата меди (почти бесцветный).

Ход исследования:

К моче, подкисленной уксусной кислотой, прибавляют насыщенный раствор хлорида натрия (1/3 объема), кипятят и горячую жидкость фильтруют. Альбумозы проходят в фильтрат, в котором их присутствие определяют биуретовой реакцией. К фильтрату прибавляют 1/2 объема концентрированного раствора едкого натра и несколько капель слабого раствора сульфата меди. При положительной пробе получается красно-фиолетовое окрашивание.

При положительной пробе с сульфосалициловой кислотой мочу нагревают. Если муть исчезает и вновь появляется при охлаждении, это означает, что моча содержит альбумозы или белковое тело Бенс-Джонса.

Белок в моче: методы определения

Патологическая протеинурия является одним из наиболее важных и постоянных признаков заболеваний почек и мочевых путей. Определение концентрации белка в моче является обязательным и важным элементом исследования мочи. Выявление и количественная оценка протеинурии важна не только в диагностике многих первичных и вторичных заболеваний почек, оценка изменения выраженности протеинурии в динамике несет информацию о течении патологического процесса, об эффективности проводимого лечения. Обнаружение белка в моче даже в следовых количествах должно настораживать в отношении возможного заболевания почек или мочевых путей и требует повторного анализа. Особо следует отметить бессмысленность исследования мочи и, в частности, определения белка мочи без соблюдения всех правил ее сбора .

Все методы определения белка в моче можно разделить на:

Качественные,

Полуколичественные,

Количественные.

Качественные методы

Все качественные пробы на белок в моче основаны на способности белков к денатурации под влиянием различных физических и химических факторов. При наличии белка в исследуемом образце мочи появляется либо помутнение, либо выпадение хлопьевидного осадка.

Условия определения белка в моче на основе реакции коагуляции:

Моча должна иметь кислую реакцию. Мочу щелочной реакции подкисляют несколькими (2 - 3) каплями уксусной кислоты (5 – 10%).

Моча должна быть прозрачной. Помутнение устраняется через бумажный фильтр. Если помутнение не исчезает, добавляют тальк или жженую магнезию (около 1 чайной ложки на 100 мл мочи), взбалтывают и фильтруют.

Качественную пробу следует проводить в двух пробирках, одна из них – контрольная.

Искать помутнение следует на черном фоне в проходящем свете.

К качественным методам определения белка в моче относятся:

кольцевая проба Геллера ,

проба с 15 – 20% сульфосалициловой кислотой ,

проба с кипячением, и другие.

Как показывают многочисленные исследования, ни один из большого числа известных методов качественного определения белка в моче не позволяет получать надежные и воспроизводимые результаты. Несмотря на это, в большинстве КДЛ в России эти методы широко используются в качестве скрининга – в моче с положительной качественной реакцией в дальнейшем проводят количественное определение белка. Из качественных реакций чаще используют пробу Геллера и пробу с сульфосалициловой кислотой, однако пробу с сульфосалициловой кислотой большей частью считают наиболее подходящей для выявления патологической протеинурии. Проба с кипячением в настоящее время практически не используется в связи с ее трудоемкостью и длительностью.

Полуколичественные методы

К полуколичественным методам относятся:

метод Брандберга-Робертса-Стольникова ,

определение белка в моче с помощью диагностических тест-полосок.

В основе метода Брандберга-Робертса-Стольникова лежит кольцевая проба Геллера, поэтому при данном методе наблюдаются те же ошибки, что и при пробе Геллера.

В настоящее время для определения белка в моче все чаще используются диагностические полоски. Для полуколичественного определения белка в моче на полоске в качестве индикатора чаще всего используется краситель бромфеноловый синий в цитратном буфере. О содержании белка в моче судят по интенсивности сине-зеленой окраски, развивающейся после контакта реакционной зоны с мочой. Результат оценивается визуально или с помощью анализаторов мочи. Несмотря на большую популярность и очевидные преимущества методов сухой химии (простота, скорость выполнения анализа) данные методы анализа мочи в целом и определения белка в частности не лишены серьезных недостатков. Одним из них, приводящих к искажению диагностической информации, является большая чувствительность индикатора бромфенолового синего к альбумину по сравнению с другими белками. В связи с этим, тест-полоски в основном приспособлены к обнаружению селективной гломерулярной протеинурии, когда практически весь белок мочи представлен альбумином. При прогрессировании изменений и переходе селективной гломерулярной протеинурии в неселективную (появление в моче глобулинов) результаты определения белка оказываются заниженными по сравнению с истинными значениями. Данный факт не дает возможности использовать данный метод определения белка в моче для оценки состояния почек (гломерулярного фильтра) в динамике. При тубулярной протеинурии результаты определения белка также оказываются заниженными. Определение белка с помощью диагностических полосок не является надежным индикатором низких уровней протеинурии (большинство выпускаемых в настоящее время диагностических полосок не обладают способностью улавливать белок в моче в концентрации ниже, чем 0,15 г/л). Отрицательные результаты определения белка на полосках не исключают присутствия в моче глобулинов, гемоглобина, уромукоида, белка Бенс-Джонса и других парапротеинов.

Хлопья слизи с высоким содержанием гликопротеидов (например, при воспалительных процессах в мочевых путях, пиурии, бактериурии) могут оседать на индикаторной зоне полоски и приводить к ложноположительным результатам. Ложноположительные результаты могут также быть связаны с высокой концентрацией мочевины . Плохое освещение и нарушение цветоощущения может быть причиной неточного результата.

В связи с этим, использование диагностических полосок следует ограничить скринирующими процедурами, а результаты, полученные с их помощью, следует рассматривать лишь как ориентировочные.

Количественные методы

Корректное количественное определение белка в моче в ряде случаев оказывается непростой задачей. Трудности ее решения определяются следующим рядом факторов:

присутствием в моче множества соединений, способных вмешиваться в ход химических реакций;

значительными колебаниями содержания и состава белков мочи при различных заболеваниях, затрудняющими выбор адекватного калибровочного материала.

В клинических лабораториях преимущественно применяются так называемые «рутинные» методы определения белка в моче, однако они далеко не всегда позволяют получать удовлетворительные результаты.

С точки зрения специалиста-аналитика, работающего в лаборатории, метод, предназначенный для количественного определения белка в моче, должен отвечать следующим требованиям:

обладать линейной зависимостью между поглощением образовавшегося в ходе химической реакции комплекса и содержанием белка в пробе в широком диапазоне концентраций, что позволит избежать дополнительных операций при подготовке пробы к исследованию;

должен быть прост, не требовать высокой квалификации исполнителя, выполняться при малом количестве операций;

обладать высокой чувствительностью, аналитической надежностью при использовании небольших объемов исследуемого материала;

быть устойчивым к воздействию различных факторов (колебаниям состава образца, присутствию лекарственных препаратов и др.);

обладать приемлемой стоимостью;

быть легко адаптируемым к автоанализаторам;

результат определения не должен зависеть от белкового состава исследуемого образца мочи.

Ни один из известных к настоящему времени методов количественного определения белка в моче не может в полной мере претендовать на роль «золотого стандарта».

Количественные методы определения белка в моче можно разделить на турбидиметрические и колориметрические.

Турбидиметрические методы

К турбидиметрическим методам относятся:

определение белка с сульфосалициловой кислотой (ССК),

определение белка с трихлоруксусной кислотой (ТХУ),

определение белка с бензетоний хлоридом.

Турбидиметрические методы основаны на снижении растворимости белков мочи вследствие образования суспензии взвешенных частиц под воздействием преципитирующих агентов. О содержании белка в исследуемой пробе судят либо по интенсивности светорассеяния, определяемого числом светорассеивающих частиц (нефелометрический метод анализа), либо по ослаблению светового потока образовавшейся суспензией (турбидиметрический метод анализа).

Величина светорассеяния в преципитационных методах обнаружения белка в моче зависит от множества факторов: скорости смешивания реактивов, температуры реакционной смеси, значения pH среды, присутствия посторонних соединений, способов фотометрии. Тщательное соблюдение условий реакции способствует образованию стабильной суспензии с постоянным размером взвешенных частиц и получению относительно воспроизводимых результатов.

Некоторые лекарственные препараты влияют на результаты турбидиметрических методов определения белка в моче, приводя к так называемым «ложноположительным», либо «ложноотрицательным» результатам. К ним относятся некоторые антибиотики (бензилпенициллин, клоксациллин и др.), рентгеноконтрастирующие йодсодержащие вещества, сульфаниламидные препараты.

Турбидиметрические методы плохо поддаются стандартизации, часто приводят к получению ошибочных результатов, но, несмотря на это, в настоящее время они широко используются в лабораториях из-за невысокой стоимости и доступности реактивов. Наиболее широко в России используется метод определения белка с сульфосалициловой кислотой.

Колориметрические методы

Наиболее чувствительными и точными являются колориметрические методы определения общего белка мочи, основанные на специфических цветных реакциях белков.

К ним относятся:

биуретовая реакция,

метод Лоури,

методы, основанные на способности различных красителей образовывать комплексы с белками:

Понсо S (Ponceau S),

Кумасси бриллиантовый синий (Coomassie Brilliant Blue)

пирогаллоловый красный (Pyrogallol Red).

С точки зрения исполнителя, в повседневной работе лаборатории при большом потоке исследований биуретовый метод является неудобным из-за большого числа операций. В то же время, метод характеризуется высокой аналитической надежностью, позволяет определять белок в широком диапазоне концентраций и выявлять альбумин, глобулины и парапротеины со сравнимой чувствительностью, вследствие чего биуретовый метод рассматривают в качестве референтного и рекомендуют для сравнения других аналитических методов обнаружения белка в моче. Биуретовый метод определения белка в моче предпочтительно выполнять в лабораториях, обслуживающих нефрологические отделения, и использовать в тех случаях, когда результаты определения с помощью других методов представляются сомнительными, а также для определения величины суточной потери белка у нефрологических больных.

Метод Лоури, обладающий более высокой чувствительностью по сравнению с биуретовым методом, сочетает биуретовую реакцию и реакцию Фолина на аминокислоты тирозин и триптофан в составе белковой молекулы. Несмотря на высокую чувствительность, данный метод не всегда обеспечивает получение надежных результатов при определении содержания белка в моче. Причиной тому служит неспецифическое взаимодействие реактива Фолина с небелковыми компонентами мочи (чаще всего аминокислотами, мочевой кислотой, углеводами). Отделение этих и других компонентов мочи путем диализа или осаждения белков позволяет с успехом использовать данный метод для количественного определения белка в моче. Некоторые лекарственные препараты – салицилаты, хлорпромазин, тетрациклины способны оказывать влияние на данный метод и извращать результаты исследования.

Достаточная чувствительность, хорошая воспроизводимость и простота определения белка по связыванию красителей делают эти методы перспективными, однако высокая стоимость реактивов препятствует более широкому их использованию в лабораториях. В настоящее время в России все большее распространение получает метод с пирогаллоловым красным.

Проводя исследование уровня протеинурии, нужно иметь ввиду, что различные методы определения протеинурии имеют разную чувствительность и специфичность к многочисленным белкам мочи.

Исходя из эмпирических данных, рекомендуется определять белок двумя разными методами и рассчитывать истинное значение по одной из приведенных формул: протеинурия = 0,4799 B + 0,5230 L; протеинурия = 1,5484 B – 0,4825 S; протеинурия = 0,2167 S + 0,7579 L; протеинурия = 1,0748 P – 0,0986 B; протеинурия = 1,0104 P – 0,0289 S; протеинурия = 0,8959 P + 0,0845 L; где B – результат измерения с Кумасси G-250; L - результат измерения с реактивом Лоури; P - результат измерения с молибдатом пирогаллола; S - результат измерения с сульфосалициловой кислотой.

Учитывая выраженные колебания уровня протеинурии в различное время суток, а также зависимость концентрации белка в моче от диуреза, различное его содержание в отдельных порциях мочи, в настоящее время при патологии почек принято оценивать выраженность протеинурии по суточной потере белка с мочой, то есть определять так называемую суточную протеинурию. Она выражается в г/сут.

При невозможности сбора суточной мочи рекомендуется определять в разовой порции мочи концентрации белка и креатинина. Поскольку скорость выделения креатинина в течение дня достаточно постоянна и не зависит от изменения скорости мочеотделения, отношение концентрации белка к концентрации креатинина постоянно. Данное отношение хорошо коррелирует с суточной экскрецией белка и, следовательно, может использоваться для оценки выраженности протеинурии. В норме отношение белок/креатинин должно быть менее 0,2. Белок и креатинин измеряют в г/л. Важным достоинством метода оценки выраженности протеинурии по соотношению белок-креатинин является полное исключение ошибок, связанных с невозможностью или неполным сбором суточной мочи.

Литература:

О. В. Новоселова, М. Б. Пятигорская, Ю. Е. Михайлов, "Клинические аспекты выявления и оценки протеинурии", Справочник заведующего КДЛ, № 1, январь 2007 г.

А. В. Козлов, "Протеинурия: методы ее выявления", лекция, Санкт-Петербург, СПбМАПО, 2000 г.

В. Л. Эмануэль, «Лабораторная диагностика заболеваний почек. Мочевой синдром», - Справочник заведующего КДЛ, № 12, декабрь 2006 г.

В.И. Пупкова, Л.М. Прасолова - Методы определения белка в моче (обзор литературных данных)

Справочник по клиническим лабораторным методам исследования. Под ред. Е. А. Кост. Москва, "Медицина", 197

Протеинурия — явление, при котором в моче определяется белок, что указывает на возможность поражения почек, служит фактором развития болезней сердца, кровеносных, лимфатических сосудов.

Что означает белок в моче (протеинурия)

Обнаружение белка в урине не всегда указывает на болезнь. Подобное явление свойственно даже для абсолютно здоровых людей, в урине которых может определяться белок. Переохлаждение, физические нагрузки, употребление белковой пищи приводит к появлению в моче белка, который без всякого лечения исчезает.

Во время скрининга у 17% практически здоровых людей определяется белок, но только 2% от этого числа людей положительный результат анализа служит признаком болезни почек.

Белковые молекулы не должны попадать в кровь. Они жизненно необходимы организму — являются строительным материалом для клеток, участвуют в реакциях в качестве коферментов, гормонов, антител. И у мужчин, и у женщин норма — полное отсутствие белка в моче.

Функция предотвращения потери организмом белковых молекул выполняется почками.

Фильтрацией мочи занимаются две системы почек:

1. почечные клубочки – не пропускают крупные молекулы, но не удерживают альбумины, глобулины – мелкую фракцию белковых молекул;
2. почечные канальца – адсорбируют белки, отфильтрованные клубочками, возвращают обратно в кровеносную систему.

В моче обнаруживаются (около 49%), мукопротеины, глобулины, из которых на долю иммуноглобулинов приходится около 20%.

Глобулины — сывороточные белки в большой молекулярной массой, которые вырабатываются в иммунной системе и печени. Большая их часть синтезируется иммунной системой, относится к иммуноглобулинам или антителам.

Альбумины — фракцию белков, которые первыми появляются в моче уже при незначительных поражениях почек. Некоторое количество альбуминов есть и в здоровой моче, но оно столь незначительно, что не выявляется с помощью лабораторной диагностики.

Нижний порог, который можно обнаружить при помощи лабораторной диагностики, составляет 0,033 г/л. Если в сутки теряется более 150 мг белка, то говорят о протеинурии.

Основные данные о белке в моче

Симптомы белка в моче

Заболевание при легкой степени протеинурии протекает бессимптомно. Визуально мочу, не содержащую белка, невозможно отличить от урины, в которой есть незначительное количество белка. Несколько пенистой урина становится уже при высокой степени протеинурии.

Предположить активное выведение белка с мочой можно по внешнему виду больного лишь при средней или тяжелой степени болезни по появлению отеков конечностей, лица, живота.

На ранних стадиях заболевания косвенными признаками протеинурии могут служить симптомы:

• изменения окраски мочи;
• усиливающейся слабости;
• отсутствия аппетита;
• тошноты, рвоты;
• боли в костях;
• сонливости, головокружениям;
• повышенной температуры.

Появление подобных признаков нельзя оставлять без внимания, особенно при беременности. Подобное может означать и незначительное отклонение от нормы, а может оказаться симптомом развивающегося гестоза, преэклампсии.

Диагностика

Количественная оценка потери белка – задача непростая, для достижения более полного представления о состоянии больного пользуются несколькими лабораторными анализами.

Трудности в выборе способа выявления избыточного белка в моче объясняются:

• низкой концентрацией белка, для распознавания которой требуются высокоточные приборы;
• составом мочи, усложняющим задачу, так как она содержит вещества, искажающие результат.

Как подготовиться к анализам

Наибольшую информацию позволяет получить анализ первой утренней порции мочи, которую собирают после пробуждения.

Накануне проведения анализа необходимо соблюдать условия:

• не употреблять острой, жареной, белковой пищи, алкоголь;
• исключить прием диуретиков за 48 часов;
• ограничить физическую активность;
• тщательно соблюдать правила личной гигиены.

Утренняя моча наиболее информативна, так как длительно находится в мочевом пузыре, в меньшей степени зависит от приема пищи.

Анализировать количество белка в моче можно по случайной порции, которую отбирают в любое время, но такой анализ менее информативен, выше вероятность ошибки.

Для количественной оценки суточных потерь белка делают анализ общей суточной мочи. Для этого в течение 24 часов собирают в специальный пластиковый контейнер всю мочу, выделенную за день. Начинать сбор можно в любой момент времени. Главное условие – ровно сутки сбора.

Качественные способы диагностики

Качественное определение протеинурии основано на свойстве белка денатурировать под действием физических или химических факторов. Качественные методы относятся к скрининговым, позволяющим установить наличие белка в моче, но не дающим возможности точно оценить степень протеинурии.

Используется пробы:

• с кипячением;
• сульфосалициловой кислотой;
• азотной кислотой, реактивом Ларионовой при кольцевой пробе Геллера.

Пробу с сульфосалициловой кислотой выполняют, сравнивая контрольный образец мочи с опытным, в котором к урине добавляют 7-8 капель 20% сульфосалициловой кислоты. Вывод о присутствии белка делают по интенсивности опалесцирующей мути, появляющейся в пробирке в ходе реакции.

Чаще применяют пробу Геллера с использованием 50% азотной кислоты. Чувствительность метода составляет 0,033 г/л. При такой концентрации белка в пробирке с образцом мочи и реагентом на 2-3 минутах после начала опыта появляется нитевидное кольцо белого цвета, образование которого и указывает на присутствие белка.

Проба Геллера

Полуколичественные

К полуколичественным методам относятся:

• способ определения белка в моче тест-полосками;
• метод Брандберга-Робертса-Стольникова.

Способ определения по методу Брандберга-Робертса-Стольникова основан на кольцевом методе Геллера, но позволяет более точно оценить количество белка. При выполнении теста по этой методике несколькими разведениями урины добиваются появления нитевидного белкового кольца во временном промежутке между 2- 3 минутами с начала тестирования.

В практике используется метод тест-полосок с нанесенным красителем бромфеноловым синим в качестве индикатора. Недостатком тест-полосок является избирательная чувствительность к альбумину, что приводит к искажению результата в случае повышения в моче концентрации глобулинов или других белков.

К минусам метода относится также относительно низкая чувствительность теста к белку. Реагировать на присутствие белка в моче тест полоски начинают при концентрации белка, превышающей 0,15 г/л.

Количественные методы оценки

Методы количественной оценки можно разделить условно на:

1. турбидиметрические;
2. колориметрические.

Турбидиметрические методики

Методы основаны на свойстве белков снижать растворимость под действием связывающего агента с образованием малорастворимого соединения.

Агентами, вызывающими связывание белка, могут выступать:

• сульфосалициловая кислота;
• трихлоруксусная кислота;
• бензетоний хлорид.

О результатах тестов делают выводы на основании степени ослабления светового потока в образце с суспензией по сравнению с контрольным. Результаты этого метода не всегда можно отнести к достоверным из-за различий в условиях проведения: скорости смешивания реагентов, температуры, кислотности среды.

Влияют на оценку прием лекарственных препаратов накануне, перед проведением тестов по данным методам нельзя принимать:

• антибиотики;
• сульфаниламиды;
• йодсодержащие препараты.

Метод относится к доступным по себестоимости, что позволяет его широко использовать для скрининга. Но более точные результаты можно получить с помощью более дорогостоящих колориметрических методик.

Колориметрические методы

К чувствительным методам, позволяющим точно определить концентрацию белка в моче, относятся колориметрические методики.

Сделать это с высокой точностью позволяют:

• биуретовая реакция;
• методика Лоури;
• окрашивающие методики, в которых используются красители, образующие с белками мочи комплексы, отличающиеся от образца визуально.

Колориметрические методы выявления белка в моче

Биуретовая реакция

Метод относится к надежным, обладающим высокой чувствительностью, позволяющий определять в моче альбумин, глобулины, парапротеины. Используется в качестве основного способа уточнения спорных результатов анализов, а также суточного белка в моче у больных нефрологических отделений стационаров.

Метод Лоури

Еще более точных результатов позволяет добиться метод Лоури, который основан на биуретовой реакции, а также реакции Фолина, распознающей триптофан и тирозин в молекулах белков.

Для исключения возможных ошибок пробу урину очищают с помощью диализа от аминокислот, мочевой кислоты. Ошибки возможны при употреблении салицилатов, тетрациклинов, хлорпромазина.

Окрашивающие методики

Наиболее точный способ определения белка основан на его свойстве связываться с красителями, из которых используются:

• понсо;
• кумасси бриллиантовый синий;
• пирогалловый красный.

Суточная протеинурия

В течение дня количество белка, выделяемое с мочой, изменяется. Чтобы более объективно оценить потери белка с мочой, вводят понятие суточного белка в моче. Эта величина измеряется в г/сутки.

Для быстрой оценки суточного белка в моче, в разовой порции мочи определяют количество белка и креатинина, затем по соотношению белок/креатинин делают вывод о потери белка в сутки.

Метод основан на том, что скорость выведения с мочой креатинина — величина постоянная, не изменяется в течение суток. У здорового человека в норме соотношение белок: креатинин в моче составляет 0,2.

Этот способ исключает возможные ошибки, которые могут возникнуть при сборе суточной мочи.

Расшифровка результатов

Качественные пробы чаще, чем количественные тесты, дают ложноположительные или ложноотрицательные результаты. Ошибки возникают в связи с приемом лекарств, особенностями питания, физической нагрузки накануне сдачи анализа.

Тест с сульфосалициловой кислотой

Расшифровка этого качественного теста дается по визуальной оценке помутнения в пробирке в сравнении результата теста с контрольной:

1. слабоположительная реакция оценивается, как +;
2. положительная ++;
3. резко положительная +++.

Проба Геллера

Кольцевая проба Геллера более точно оценивает присутствие белка в моче, но не позволяет дать количественную оценку белка в моче. Как и тест с сульфосалициловой кислотой, проба Геллера дает лишь приблизительное представление о содержании белка в урине.

Тест Брандберга-Робертса-Стольникова

Метод позволяет оценить степень протеинурии количественно, но слишком трудоемок, неточен, так как при сильном разведении точность оценки снижается.

Чтобы вычислить белок, нужно умножить степень разведения мочи на 0, 033 г/л:

Объем урины (мл)	Объем воды (мл)	Разведение	Содержание белка (г/л)
1	1	1: 2	0,066
1	2	1: 3	0,099
1	3	1: 4	0,132
1	4	1: 5	0,165
1	5	1: 6	0,198
1	6	1: 7	0,231
1	7	1: 8	0,264
1	8	1: 9	0,297
1	9	1: 10	0,33

Тестирование тест-полоской

Проведение теста не требует специальных условий, эту процедуру легко проделать в домашних условиях. Для этого необходимо тест-полоску опустить в мочу на 2 минуты.

Результаты будут выражаться количеством плюсов на полоске, расшифровка которой содержится в таблице:

1. Результаты тестирования, соответствующие значением до 30 мг/100 мл соответствуют физиологической протеинурии.
2. Значения на тест-полосках 1+ и 2++ означают значительную протеинурию.
3. Значения 3+++, 4++++ отмечаются при патологической протеинурии, вызванной заболеваниями почек.

Тест-полоски позволяют лишь приблизительно определить повышенный белок в моче. Для точной диагностики их не используют, а уж тем более они не могут сказать что это значит.

Не позволяют тест-полоски адекватно оценить количество белка в моче у беременных. Более надежным способом оценки служит определение белка по суточной моче.
Определение белка в моче при помощи тест-полоски:

Общий белок в моче

Суточный белок в моче служит более точной диагностикой оценки функционального состояния почек. Для этого необходимо собрать всю мочу, выделяемую почками за сутки.

Допустимыми значениями для соотношения белок/креатинин считаются данные, приведенные в таблице:

При потере более 3,5 г белка в сутки состояние называется массивной протеинурией.

Если в моче много белка требуется повторное обследование через 1 месяц, затем через 3 месяца, по результатам, которых устанавливается почему норма превышена.

Причины

Причинами повышенного белка в моче является его увеличенное производство в организме и нарушение работы почек, различают протеинурию:

• физиологическую – незначительные отклонения от нормы вызываются физиологическими процессами, разрешаются самопроизвольно;
• патологическую – изменения вызываются в результате патологического процесса в почках или других органах тела, без лечения прогрессирует.

Физиологическая протеинурия

Небольшое повышение белка может наблюдаться при обильном белковом питании, механические ожогах, травмах, сопровождающихся усилением выработки иммуноглобулинов.

Легкая степень протеинурии может быть вызвана физической нагрузкой, психо-эмоциональным напряжением, приемом некоторых лекарств.

К физиологической протеинурии относится повышение белка в моче у детей в первые дни после рождения. Но уже после недели жизни содержание белка в моче у ребенка рассматривается, как отклонение от нормы и указывает на развивающуюся патологию.

Заболевания почек, инфекционные заболевания также иногда сопровождаются появлением белка в моче.

Подобные состояния соответствуют обычно легкой степени протеинурии, являются преходящими явлениями, быстро самостоятельно проходят, не требуя специального лечения.

Патологическая протеинурия

Более тяжелые состояния, выраженная протеинурия отмечается в случае:

• диабета;
• болезней сердца;
• раке мочевого пузыря;
• множественной миеломе;
• инфекции, лекарственном поражении, поликистозе почек;
• высоком кровяном давлении;
• системной красной волчанке;
• синдроме Гудпасчера.

Вызвать следы белка в моче может кишечная непроходимость, сердечная недостаточность, гипертиреоз.

Классификация

Разновидности протеинурии классифицирует несколькими способами. Для качественной оценки белков, воспользоваться можно классификацией Ярошевского.

По систематике Ярошевского, созданной в 1971 году, различают протеинурию:

1. ренальную – куда входит нарушение клубочковой фильтрации, выделение белка канальцев, недостаточность реадсорбции белков в канальцах;
2. преренальная – возникает вне почек, выведение из организма гемоглобина, белков, возникающих в избытке в крови в результате множественной миеломы;
3. постренальная – возникает на участке мочевыводящих путей после почек, выведение белка при разрушении мочевыводящих органов.

Для количественной оценки происходящего выделяют условно степени протеинурии. Нужно помнить, что они могут легко переходить в более тяжелую без лечения.

Самая тяжелая стадия протеинурии развивается при потере более 3 г белка в сутки. Потеря белка от 30 мг до 300 мг в сутки соответствует умеренной стадии или микроальбумнурии. До 30 мг белка в суточной моче означает легкую степень протеинурии.